Biuret法測定蛋白質含量逐漸隱退的原因分析
來源： http://www.jiansheschool.com/ 類別：實用技術 更新時間：2015-03-16 閱讀次
蛋白質含量測定法，是生物化學研究中最常用、最基本的分析方法之一。蛋白質的測定在不斷的更新以及替換，但是不論時代如何的進步，蛋白質測定儀就有四種較為經典的檢測 方法，凱氏定氮法（可以直接使用自動型凱氏定氮儀來進行替代），雙縮尿法（Biuret法 ）、Folin－酚試劑法（Lowry法）和紫外吸收法。這四種方法是即經典又傳統的檢測方法 ，四種方法中Lowry法靈敏度最高，比紫外吸收法靈敏10～20倍，比Biuret法靈敏100倍以上。即使這樣在日常過程中時常會使用凱氏定氮儀測定的結果作為標準蛋白質，其中雙縮尿法測定蛋白質含量慢慢的退出檢測市場，究竟是何愿意促使的呢？
雙縮脲法是傳統的分光光度法測定蛋白質的方法。在進行測定的時候，必須預先用標準蛋白質溶液制作一個標準校正曲線，通常用牛血清白蛋白水溶液做蛋白質標準溶液。不同濃度的標準蛋白質溶液加入雙縮脲試劑后，反應生成的顏色產物用紫外-可見分光光度計在540nm波長下測定吸光度，以雙縮脲試劑加緩沖或水作空白對照。然后將測得的值分別對蛋白濃度(mg/ml)作圖，得標準曲線。未知蛋白樣品用雙縮脲試劑做同樣處理，根據測得吸光度值在標準曲線上直接查得未知蛋白質樣品中得蛋白質濃度。
此方法對各種蛋白質呈色基本相同；特異性和準確度好，精密度好；呈色穩定性好，試劑單一，方法簡便，但靈敏度不高，約為1mg，故現在已很少使用。在進行測定的過程中，樣品的取用量的多少直接影響著測定的結果準確度，同時測量的穩定性遠比使用凱氏定氮儀來得低很多。即使這種方法使用的人比較的少，但是這種檢測方法仍然沒有完全的退出這 個市場，在某些領域中依舊使用這種個方法進行測定。
雙縮脲法是傳統的分光光度法測定蛋白質的方法。在進行測定的時候，必須預先用標準蛋白質溶液制作一個標準校正曲線，通常用牛血清白蛋白水溶液做蛋白質標準溶液。不同濃度的標準蛋白質溶液加入雙縮脲試劑后，反應生成的顏色產物用紫外-可見分光光度計在540nm波長下測定吸光度，以雙縮脲試劑加緩沖或水作空白對照。然后將測得的值分別對蛋白濃度(mg/ml)作圖，得標準曲線。未知蛋白樣品用雙縮脲試劑做同樣處理，根據測得吸光度值在標準曲線上直接查得未知蛋白質樣品中得蛋白質濃度。
此方法對各種蛋白質呈色基本相同；特異性和準確度好，精密度好；呈色穩定性好，試劑單一，方法簡便，但靈敏度不高，約為1mg，故現在已很少使用。在進行測定的過程中，樣品的取用量的多少直接影響著測定的結果準確度，同時測量的穩定性遠比使用凱氏定氮儀來得低很多。即使這種方法使用的人比較的少，但是這種檢測方法仍然沒有完全的退出這 個市場，在某些領域中依舊使用這種個方法進行測定。
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