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    蛋白質(zhì)檢測技術(shù)的不斷創(chuàng)新

    來源: http://www.jiansheschool.com/  類別:實用技術(shù)  更新時間:2014-09-03  閱讀


        為了對樣品進(jìn)行合理的分析,我們需要對蛋白質(zhì)的具體組成結(jié)構(gòu)進(jìn)行合理的研究。蛋白質(zhì)和一些抗體的研究已經(jīng)是現(xiàn)在農(nóng)業(yè)上比較重要的一項技術(shù)開發(fā)了,是進(jìn)行優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)篩選的最適宜的一項措施。然而現(xiàn)在蛋白質(zhì)的技術(shù)研究還是存在著一些局限性的,這些還是有待于我們?nèi)「纳。我們在研究的過程中是需要使用自動型凱氏定氮儀來完成的,基于固定在幾個平方微米上的作用單元的/微點0分析在原理上比傳統(tǒng)的肉眼可見的免疫分析具有更高的靈敏度,更適于對分析物的測定。

        作為蛋白質(zhì)天然結(jié)合物的抗體以一定的排列方式被固定在固體載體上形成了抗體微陣列。與此對應(yīng),發(fā)展了蛋白質(zhì)微陣列技術(shù)以研究蛋白質(zhì)的相互作用和修飾。盡管這些陣列被設(shè)想成為研究酶或抗體特異性的特征及闡明基因功能的一種有用工具,但這一技術(shù)存在的許多缺陷還未得到解決,限制了其潛在作用的完全發(fā)揮。這些限制因素包括生成足夠的量、在固化過程中保持蛋白質(zhì)的功能,以及提供所需的相對和絕對靈敏度。

        發(fā)展高容量的微陣列的步驟之一包括了通過高密度細(xì)菌斑點在硝酸纖維素膜上產(chǎn)生陣列。細(xì)菌表達(dá)和分泌的抗體片段提供給以濾膜為基質(zhì)的 ELISA,用于辨別對供試抗原有特異性的抗體片段。所考慮的最后的步驟是在包被的玻璃片上純化的蛋白質(zhì)和抗體斑點的微縮化。玻璃片的剛性結(jié)構(gòu)使得增加特征基團(tuán)的密度及在降低樣品溶液量的情況下提供定量化的分析成為可能。微陣列基質(zhì)的一個關(guān)鍵條件是提供優(yōu)化的結(jié)合條件。

        始終存在對于具有低非特異性背景和低差異性的高結(jié)合能力的關(guān)鍵需求。三維凝膠或膜包被的表面,如聚丙烯酰胺、瓊脂糖和硝酸纖維素。這類表面主要通過物理吸附結(jié)合蛋白質(zhì),其優(yōu)點在于它們被認(rèn)為最適于保持天然蛋白質(zhì)構(gòu)像。然而,這類表面的缺點是信號強(qiáng)度的差異性較大.包括表面包被如樹突或抗生物素蛋白片,結(jié)合了前兩類表面后,在表面上表現(xiàn)出一種超分子結(jié)構(gòu)。中國糧油儀器在線 http://www.jiansheschool.com/

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